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    BV2細胞異常生長形態(tài)解析及解決方案

    發(fā)布時間： 2022-01-06　　點擊次數(shù)： 4204次

    BV2

    常用的小膠質(zhì)細胞模型，它用攜帶v-raf/v-myc基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒（J2）感染原代小膠質(zhì)細胞而獲得永生化。BV2細胞表達非特異性酯酶活性，它具有吞噬性能力，并缺乏過氧化物酶活性。這種細胞不僅會分泌溶菌酶，在適當?shù)拇碳は?，還會分泌白細胞介素1和腫瘤壞死因子。


    此外，BV2細胞還表現(xiàn)出自發(fā)的抗念珠菌活性，用干擾素-Y處理后獲得殺腫瘤活性。



    從表型上看，BV2細胞對MAC1和MAC2抗原呈陽性，而對MAC3、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）和半乳糖核苷（GC）抗原呈陰性[1]。

    圖片

    圖A. BV2細胞顯微照片，bar=30 μm.

    圖B. 通過掃描電鏡觀察，在玻璃蓋板上培養(yǎng)的BV2細胞，bar=5 μm.

    圖C. 通過透射電鏡觀察，BV2細胞的部分細胞質(zhì)吞噬iCA，bar=3 μm.

    （圖片引用自文獻[1]）


    在培養(yǎng)BV2細胞的時候，同學們最常遇到的問題就是生長形態(tài)異常。生長形態(tài)異常往往伴隨著細胞生長緩慢、細胞死亡等，導致實驗做不出結(jié)果，給大家?guī)碇刂乩_。


    小普根據(jù)多年的實驗經(jīng)驗，為大家整理了這一現(xiàn)象可能發(fā)生的原因，及相應解決方案。


    首先我們來看看正常的BV2形態(tài)。結(jié)合眾多文獻和Procell的細胞圖片來看，BV2是一種半貼壁半懸浮細胞，它的形態(tài)并不規(guī)則，存在圓形和梭形兩種。


    懸浮細胞為圓形，貼壁細胞既有圓形也有梭形。由于圓形細胞折光率高，它的邊緣看起來是發(fā)亮的；梭形細胞則向兩端伸出黑色突起。

    圖片

    （圖片源自Procell）


    那么，異常生長的BV2細胞有哪些形態(tài)呢？


    如何根據(jù)不同的異常生長形態(tài)，調(diào)整改善培養(yǎng)條件，及時解決問題？


    小普總結(jié)如下：


    圖片

    形態(tài)1：細胞全部飄起，*不貼壁

    解析：分為培養(yǎng)基偏堿及復蘇后不貼壁兩種情況。

    （1）培養(yǎng)基偏堿。培養(yǎng)瓶不透氣或者開封時間過長，培養(yǎng)基PH將增大，可見培養(yǎng)基呈紫紅色。BV2對培養(yǎng)基酸堿度較為敏感，在偏堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)小時后將會全部飄起。

    解決方案：給細胞換上新鮮配制的培養(yǎng)基，并使用透氣瓶。

    （2）復蘇后不貼壁。需要檢查凍存或復蘇操作過程，以及培養(yǎng)基是否存在問題。

    解決方案：確保凍存前狀態(tài)良好及凍存復蘇操作規(guī)范，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，即可解決問題。


    圖片

    形態(tài)2：細胞形態(tài)變?yōu)榘⒚装蜆?/strong>

    解析：小膠質(zhì)細胞是一種可塑性*的細胞，可通過特定因素激活，從而發(fā)揮其免疫功能。從靜息態(tài)變?yōu)榧せ顟B(tài)的過程中，小膠質(zhì)細胞形態(tài)也隨之發(fā)生改變。


    實驗中常用細菌脂多糖（LPS）和干擾素-γ（IFNγ），分別模擬細菌和病毒感染，來刺激小膠質(zhì)細胞激活。受到刺激的小膠質(zhì)細胞突起縮短變厚，胞體增大，呈現(xiàn)阿米巴樣（如下圖所示）。


    但有的時候BV2形態(tài)變化并不明顯，還需要結(jié)合其他實驗，如檢測NO、IL-13等炎癥因子的表達，來確定BV2是否被定向激活。

    圖片

    （圖片引用自文獻[2]）


    如果細胞沒有受到任何刺激，就已經(jīng)呈現(xiàn)阿米巴樣，或者受刺激后，炎癥因子表達沒有差異，那么細胞有可能發(fā)生了自分化。


    其原因可以從以下幾點考慮：

    （1）存在潛在微生物污染，刺激細胞自分化。

    解決方案：通過去掉培養(yǎng)基中的抗生素確定污染類型，并排查污染源頭。

    （2）使用的胎牛血清內(nèi)毒素高，內(nèi)毒素刺激細胞自分化。

    解決方案：嘗試使用超低內(nèi)毒素胎牛血清，或許能得到改善。


    圖片

    形態(tài)3：全都是分枝狀細胞，圓形細胞少

    解析：這種形態(tài)往往伴隨著細胞生長慢或生長停滯的情況。由于圓形細胞增殖速度較快，在圓形細胞缺失的狀況下，整體增殖速度就會減慢。

    解決方案：由于BV2是一種半貼壁半懸浮細胞，貼壁和懸浮細胞的比例并不固定，當懸浮細胞較多時，換液和傳代時要將懸浮細胞收集，避免圓形細胞的大量損失。


    總而言之，BV2細胞的形態(tài)、生長狀態(tài)與其生長環(huán)境息息相關，給細胞以最合適的環(huán)境，嚴格按照要求規(guī)范操作，細胞也將用好的狀態(tài)回報你。


    參考文獻：

    [1] PubMed=2110186; DOI=10.1016/0165-5728(90)90073-V.

    Blasi E., Barluzzi R., Bocchini V., Mazzolla R., Bistoni F.

    Immortalization of murine microglial cells by a v-raf/v-myc carrying retrovirus.

    J. Neuroimmunol. 27:229-237(1990)

    [2] PMID=31590042 ; DOI=10.1016/j.molimm.2019.09.020.

    Zhang J, Zheng Y, Luo Y, Du Y, Zhang X, Fu J.

    Curcumin inhibits LPS-induced neuroinflammation by promoting microglial M2 polarization via TREM2/ TLR4/ NF-κB pathways in BV2 cells. 



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